Der LAL-Test
Der LAL-Test ist ein höchstempfindlicher, quantitativer Test auf Endotoxine. Endotoxine sind Pyrogene bakterieller Herkunft. Pyrogene wiederum sind Fieber erregende Stoffe. Daher muss sichergestellt werden, dass Produkte die injiziert werden, oder zur Injektion verwendet werden (Stichwort Medizinprodukte) keinesfalls mehr Endotoxin enthalten, als in den Monographien der entsprechenden Pharmakopöen festgelegt ist.
Aus diesem Grund ist es sehr wichtig, dass nur garantiert (zertifiziert) pyrogenfreie Ausrüstung verwendet wird (z.B.Glasfläschchen, Stopfen, Röhrchen, Pipettenspitzen, Mikrotiterplatten, usw.), da es sonst unweigerlich zu nicht reproduzierbaren falschen positiven Ergebnissen kommt. Weiters sollte sämtliche Proben berührende Ausrüstung dokumentiert auf hemmende bzw. aktivierende Eigenschaften untersucht werden. Auch alle Probenarten müssen auf Hemmung/Aktivierung getestet werden.
Es wird die chromogene Methode zur Anwendung gebracht.
Testprinzip
Das Endotoxin gram-negativer Bakterien katalysiert die Aktivierung eines Proenzym im Limulus Amoebocyten Lysat (LAL). Die Rate der Aktivierung wird durch die Menge an anwesendem Endotoxin gesteuert. Das aktivierte Enzym katalysiert die Abspaltung von p-Nitroanilin (pNA) (gelb) vom farblosen Substrat Ac-Ile-Glu-Ala-Arg-pNA. Das entstandene pNA wird bei 405 nm photometrisch gemessen.
Test Methoden
Endpunkt
Nach einer definierten Reaktionszeit wird die Substratspaltung durch Zugabe von Essigsäure gestoppt und das gebildete pNA photometrisch bei 405 nm gemessen.
Die Gelbfärbung ist proportional zum vorhandenen Endotoxin. Der Endotoxingehalt der Probe wird anhand einer Kalibrierkurve bestimmt, die mit einer Verdünnungsreihe aus Standard-Endotoxin auf jeder Platte erstellt wurde.
Kinetic
Ein Kinetik-Reader überwacht über eine gewisse Zeit automatisch das Auftreten einer Gelbfärbung (= Substratspaltung). Die Zeit bis zum Auftreten einer bestimmten Gelbfärbung (Reaktionszeit) ist umgekehrt proportional zum vorhandenen Endotoxin. Die definierte Intensität der Gelbfärbung, bei deren Erreichen dann die Reaktionszeit festgelegt wird, ist die Onset-OD oder auch Delta m-OD. Der Test ist beendet, wenn der niedrigste Standard die Onset-OD erreicht hat. Der Endotoxingehalt der Probe wird anhand einer Kalibrierkurve bestimmt, die mit einer Verdünnungsreihe aus Standard-Endotoxin auf jeder Platte erstellt wurde.
Das Pharmalab System LAL
- ist eine "web-based" Applikation und enthält alles, was Sie für den LAL-Test brauchen.
- ist 21 CFR part 11 compliant
- enthält ein user management
- enthält ein vollständiges Proben- (sample) und Test- (task) Management
- führt alle Berechnungen aus
- erledigt sämtliche Bericht- und Befunderstellungen
- unterstützt elektronische Unterschrift
- führt Sie durch den ganzen Ablauf der manuellen Tests
- steuert den Mikrotiterplatten-Reader
- startet die automatischen Methoden der TECAN Genesis 100/8 Workstation
- ist komplett "audit trailed"
- verfügt über zahlreiche Verwaltungswerkzeuge
- Pharmalab steuert alle Funktionen des TECAN SUNRISE RC/TC microplate Readers
- Ansteuerung der TECAN Genesis Workstation 100/8
Wann soll man einen Roboter einsetzen?
Die Entscheidung einen Roboter zu verwenden beruht in erster Linie auf dem Probendurchsatz.
Wir empfehlen ab cirka 5000 Proben pro Jahr sich eines Roboters zu bedienen. Auch wenn Sie stark schwankende Ergebnisse haben, kann der Einsatz eines Roboters Abhilfe schaffen.
Die größten Vorteile eines Roboters sind zweifellos die hohe Reproduzierbarkeit, die Zeitersparnis und nicht zuletzt die hohe Kapazität eines vollautomatisierten Systems.
Die Kombination von Pharmalab, TECAN SUNRISE Reader und TECAN Genesis Workstation 100/8 bietet Ihnen ein Höchstmaß an Genauigkeit und Effizienz.
